viernes, 3 de octubre de 2014

ENSAYO INMUNO - ENZIMÁTICO (ELISA)

Análisis de una muestra de sangre para diagnosticar la presencia o ausencia de anticuerpos específicos de una determinada enfermedad vírica.


Ejemplo: VIH, Rotavirus,..


La prueba de Elisa es un es un ensayo inmunoenzimático de diagnóstico que permite detectar los causante de una enfermedad en el caso de un organismo que ha  estado en contacto con él, ampliamente empleado en el área médica para la cuantificación de moléculas especialmente de aquellas que experimentan cambios en diferentes estados como pueden ser infecciones por bacterias, virus, hongos o parásitos o fases activas de enfermedades autoinmunes  y/o los anticuerpos generados por el organismo.

Como ejemplo se pueden medir por ELISA hormonas, autoanticuerpos, inmunoglobulinas contra antígenos de patógenos, toxinas, antígenos. La técnica de ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay) es utilizada para la detección de muy diversas moléculas biológicas, basándose en la especificidad del reconocimiento antígeno-anticuerpo y en la sensibilidad de las pruebas enzimáticas.

La prueba de ELISA o enzimoinmunoensayo tiene numerosas variantes de este tipo de ensayo. Entre ellos se encuentran los métodos directo e indirecto.

El método directo o la prueba de Western-Blot, permite la detección del antígeno con un anticuerpo específico conjugado con una enzima como sistema de marcaje. Si después de realizarlas el resultado sigue siendo positivo, este resultado se considera indicativo de la presencia de anticuerpos para la enfermedad estudiada.

MÉTODO Directo.

1. Fijación de anticuerpos a la fase solida.
2. Agrego la muestra del paciente el cual se une a la Ac de la fase solida.
3. Agrego Ac marcados específicos para ese Ag.
4. Luego sustrato que genera el color.


 Pero aún así no es un método definitivo ya que tiene un índice elevado de falsos positivos. Es por ello que cuando el resultado es negativo, no se suelen solicitar otras pruebas posteriores, pero cuando es positivo, (después de haber realizado la prueba dos veces), se repite el análisis de la misma muestra utilizando métodos más específicos como pueden ser la inmunofluorescencia indirecta En el método indirecto el antígeno reacciona con el anticuerpo específico.

MÉTODO Indirecto

1. Los Ag en la fase solida.
2. Ac del paciente
3. Anti-anticuerpo marcado
4. Sustrato que genera color.





En esta animación se describe gráficamente la técnica de inmunoabsorción con marcado enzimático llamada ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)


Video para promover conciencia sobre la aplicación de la  prueba de Elisa para la detección del VIH, especialmente en mujeres en estado de embarazo.


El complejo antígeno-anticuerpo es entonces detectado por un segundo anticuerpo que reconoce dominios constantes de anticuerpos. Este anticuerpo, que suele ser específico de especie, es el que está marcado enzimáticamente. Esto permite que un mismo anticuerpo marcado sea capaz de detectar diferentes antígenos. En ambos métodos, la reacción enzimática puede ser detectada espectrofotográficamente con un lector ELISA.
La prueba de Elisa 




¿Cómo se realiza la prueba?



Se realiza una extracción de sangre al paciente, generalmente del antebrazo. La muestra se lleva al laboratorio de análisis para su proceso. Los resultados podrán tardar varios días, ya que se ha de someter a la muestra a una serie de procesos de incubación junto con una muestra de anticuerpos diluidos y, posteriormente, realizar la valoración mediante técnicas de espectrofotometría.



¿Existen riesgos?

Es un método diagnóstico que carece de riesgos para el paciente. Lo único que puede incomodar es la punción que se le practica para la extracción de sangre.


¿Qué detecta el examen de Elisa?

El examen de ELISA es una de las pruebas más eficaces para detectar el virus del VIH.

Se realiza en las enzimas y su nombre viene del término inglés "Enzyme-linked immunosorbent assay", que quiere decir “ensayo inmonoenzimático ligado a enzimas".

Este estudio es muy rápido, efectivo y confiable y sus resultados son tratados con toda la confidencialidad que el paciente requiere.

También se puede detectar el virus por medio de otro análisis, llamado por “aglutinación” y se realiza también por medio de la toma de una muestra de sangre.

Otras pruebas de laboratorio para confirmar la presencia de anticuerpos del VIH, incluyen la inmunoelectrotransferencia o examen de Western Blot, la inmunofluorescencia y la radioinmnoprecipitación o RIPA.









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